R应用 | 可变光程用于提升EP2.2.2药物颜色检测方法准确性和运行效率
目前的药物溶液颜色评估方法，特别是视觉方法，存在明显的主观性，其结果会根据观察者的感知、照明条件和经验而变化。单径长度色度计虽然更客观，但只获得一个数据点，需要基线校正。由于无法验证探测器是否在其线性范围内工作，这些限制导致读数不准确或不可靠，使质量控制复杂化。本研究比较了CTech SoloVPE®可变路径长度技术(VPT)系统和HunterLab Vista®色度计，证明VPT能够符合EP第2.2.2章指南的一致，可靠的颜色测量。VPT基于光密度优化路径长度，将样品体积要求从1-2 mL减少到仅120 μL。内置线性检测和多属性检测，提高了可靠性和效率。主要研究结果表明，VPT通过从多个点获取高质量数据，优于传统的单路径长度仪器。
根据欧洲药典(EP)第2.2.2章的规定，药物溶液，特别是单克隆抗体(mAb)溶液中颜色程度的评估是质量控制的一个关键方面。认识到颜色是一个关键的质量属性，可以确保药品在整个保质期内的安全性、有效性和一致性。颜色的变化可以表明氧化、降解或污染等情况，可能影响治疗效果。在起作用的复杂因素的例子包括紫外线照射引起色氨酸氧化(导致黄色/黄褐色变色)，以及在细胞培养过程中包含维生素B12、B2或C，分别导致红色/粉红色、黄色或棕色。这强调了在批放行过程中细致的颜色评估的重要性和稳定性研究，以确定偏离质量标准，表明潜在的稳定性问题或杂质的存在。［1］
EP第2.2.2章概述了评估药用物质颜色的视觉和仪器方法。视觉方法虽然简单而快速，但依赖于人类的感知，使得它在不同的观察者之间变得主观和不一致。缺点包括光照条件、观察者经验和色彩感知的可变性，导致不太精确和可重复的结果。相比之下，使用分光光度法的仪器方法提供客观、可量化和可重复的数据，显著降低了与视觉评估相关的主观性。[2]
仪器方法旨在通过利用三刺激值来复制人眼对颜色的感知，三刺激值量化了三原色：红、绿、蓝的强度。国际标准ISO/CIE 11664概述了在400-700 nm范围内通过透射率测量评估三刺激值X, Y, Z的程序。三刺激值随后通过转换过程转换为颜色坐标L*， a*和b*。在CIELAB色彩空间中，L*表示亮度范围从0(黑色)到100(白色)，而a*和b*分别表示绿红和蓝黄轴上的色度坐标。这些颜色坐标提供了感知上统一的颜色表示，使不同材料和照明条件下的颜色比较和评估准确一致。[3]
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为了说明在制药行业的实际应用，我们对含有单克隆抗体(mab)的九种不同的药物产品(构成稀释系列)在黄色和棕色光谱中的显色度进行了评估。允许的变化为±0.2，可接受的结果以绿色突出显示，偏差以红色突出显示。同时显示符合ep的输出和带有一个小数点的输出。为了进行比较，第6列显示了三个样本遵循EP 2.2.2要求的视觉评估结果。
用SoloVPE®和Vista®系统获得的8单抗样品的显色度和8单抗的稀释度。色度的评定参照黄色和棕色系列标准。SoloVPE®结果显示为绿色，以说明与Vista® EP输出或Vista® Raw输出±0.2的一致。
如表所示，两种仪器的输出对于大多数样品都非常接近，进一步验证了所开发方法的有效性，不仅适用于标准样品，也适用于真实的生物制药样品。特别值得注意的是，在高度着色的样品中观察到的Y0.1输出，表明光密度太高，无法准确评估1厘米光路长度的颜色程度。相比之下，SoloVPE®系统具有内置算法，可根据光密度调整路径长度，从而获得准确的读数。此外，三个样本的目视评价结果可用。虽然使用视觉和SoloVPE®方法对一个样品的颜色程度进行了相同的评估，但视觉评估与客观仪器测量之间的差异突出了视觉评估方法固有的主观性。
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在这项研究中，我们证明了符合ep的颜色评估超越了传统的单径长色度计，可以用可变径长技术(VPT)进行。SoloVPE®仪器根据样品的光密度优化了路径长度，并集成了自动线性检查，在检测器的线性范围内实时验证其操作。该功能验证了斜率回归测量的准确性，并通过直接的通过/失败度量简化了质量控制。此外，SoloVPE®系统可以显著减少样本量;通常需要1-2 mL的测量可以仅用50-120 μL进行，最大限度地减少样品消耗，并能够分析珍贵或有限的样品。此外，SoloVPE®系统允许gmp级浓度读数，便于在一次测量中进行多属性测试。多属性方法通过减少单个测试所需的时间和资源来简化工作流程，同时通过检测多种杂质或偏离规格来确保产品的安全性、有效性和一致性，使其成为质量控制的重要工具。
参考文献
关于 Repligen
Repligen（纳斯达克证交所代码：RGEN），中文名瑞普利金，是一家专注于生物工艺的全球化生命科学公司。自1981年创立以来，一直致力于为客户提供专业知识和技术创新。我们通过开发和商业化极具创新性的产品和灵活的解决方案，来帮助客户解决生物药生产过程中的关键步骤，从而推动生物工艺的进步。
Repligen总部位于美国马萨诸塞州波士顿，在美国马萨诸塞州、加利福尼亚州和新泽西州以及瑞典、法国、荷兰、德国和爱沙尼亚设有主要生产基地。
关于康腾生物
康腾生物成立于2018年，主要致力于为生物制药企业提供研发和生产用的设备、试剂和耗材等产品。我司地处于大湾区核心广州市黄埔区科学城，周边环境优美，拥有便利的交通环境。拥有专业的团队，能为客户提供高质量的产品和高效的服务。目前主要代理品牌及产品线：
Repligen 中空纤维/膜包/TFF系统/ATF系统/一次性层析系统
CTech FlowVPX和SoloVPE系统
Lonza 电转设备/内毒素/支原体检测设备及试剂盒/培养基
Pfanstiehl 海藻糖/蔗糖/甘露醇等辅料
迈邦 CHO细胞培养基/293细胞培养基/补料
赛桥（cellbri） 全封闭自动化细胞处理系统/高通量分装系统/自动化细胞扩增系统/磁珠全自动分选系统/自动转液仪
金西盟 气相液氮罐/程序降温仪/细胞冻存袋
量准 分子互作仪/自动移液工作站
BD 预灌封注射器
斯坦利思(Sterist) 异丙醇/季铵盐/过氧化氢/杀孢子剂/乙醇消毒剂
大溪生物 胎牛血清/新生牛血清
Thermo 储液袋/培养基/层析填料/ 质量分析产品/细胞工厂/PETG瓶
源培 细胞培养基及相关产品/微生物培养预灌封平皿
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